DESARROLLO:
10.1 MÉTODO DE PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE LOS ÁCIDOS NUCLEÍDOS.
La extracción del ADN de las células o virus donde se halla confinado es un paso previo en muchos procedimientos analíticos y diagnósticos.
Etapas en la extracción de ADN.
Los pasos necesarios para una correcta extracción y purificación del ADN mediante un procedimiento químico son:
1. Lisis de las células o virus. Las sales caotrópicas ayudan a romper la estructura tridimensional de macromoléculas como las proteínas o los ácidos nucleicos consiguiendo su desnaturalización. La adición de un detergente como el SOS es necesaria a menudo para eliminar las membranas.
2. Degradación de la fracción proteica asociada al ADN. Se consigue mediante la adición de una proteasa. La fracción proteica puede precipitarse mejor con la ayuda de sales como el acetato de amonio o el acetato sódico.
3. Purificación. Consta de 3 fases: Precipitación del ADN. El ADN es insoluble en alcohol, por lo que se puede precipitar etanol frío o isopropanol i recuperar mediante una centrifugación. El alcohol del sobrenadante se llevará las sales añadidas previamente.
Bibliografía:
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